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测定氨基酸的方法!!!

返回列表 来源:未知 发布日期:2021-09-06 09:17【

    氨基酸是构成蛋白质大分子的基础物质。氨基酸分析在生 物化学、临床医学、化工等领域有重要作用。目前高效液相色 谱法为分析氨基酸的重要方法;但是许多氨基酸无紫外吸收, 需要经过衍生化之后才可以测定。常用的衍生化试剂有:水合 茚三酮、邻苯二甲醛、异硫氰酸苯酯(PITC)、2,4- 二硝基氟 苯(DNFB)等。高 速 冷 冻 离 心 机(CL31R, 美 国 Thermo 公 司), 超 声 波 清 洗 器(SK5200LHC,53KHz/35KHz,上海科导仪器有限公司),pH 计(PB-10,赛 多丽丝中国仪器公司),恒温电热水浴锅(HH.SY11-NI2B, 北京市长风仪器仪表公司),恒温干燥箱(KXH 202-2A,上 海科析实验仪器厂),电子分析天平(感量:0.0001g,称量: 110g,美国 OHAUS Corp 公司),4℃ /-20℃冰箱(BCD-216KDA, 海尔集团),涡旋混合器(XW-80A,江苏海门市其林贝尔仪 器制造有限公司)。

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    碱性氨基酸:His 在流动相 pH=5.0 至 pH=6.5 时,峰型相 差不大,保留时间基本一致;Ccp 在流动相 pH 为 6.5 时峰型较 好,分离度较好;Arg 在流动相 pH=6.0 至 pH=7.0 时,峰面积 积分相差不大,峰型较好,分离度较好,虽然在流动相 pH 为 5.5 时峰面积积分最大,但是在流动相 pH=5.0 时,Arg 测不到氨基 酸峰。酸性氨基酸:Asp 的最佳柱温为 32℃;Gly 最佳柱温为 40℃。中性氨基酸:Glu 的最佳柱温为 30℃,GABA 最佳柱温 为 32℃。碱性氨基酸:His 最佳柱温为 35℃,Ccp 最佳柱温为 32℃,Arg 最佳柱温为 32℃。